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各类精液洗涤法的临床应用比较
为什么我们要洗涤精液 ?
精液洗涤的价值在于获得尽可能多的优质精子,并且尽可能去除死精、白细胞、细菌、有毒或活性氧类物质(ROS),同时也要求操作能简易化、快速化和标准化。但当下的各类精液洗涤方法很难同时满足上述所有要求,因此,研究者认为应根据精液的不同情况选择较合适的精液洗涤方法,以达到最优结果。
基于上述观点,研究者们开展了一项对比性研究,即收集了近百份精液标本(每个标本的精液量≥3mL),并考虑到现实临床问题,在上述样本中也纳入一定比例的少精症患者精液标本,然后将每份精液标本各取3个1mL分别用密度梯度离心法、上游法和简单洗涤法处理,进而比较各组精子在不同洗涤法前后的浓度、活力(PR)及回收率。
01.密度梯度离心法
将1mL 80%的密度梯度液加入离心管底部,轻柔得将1mL 40%的密度梯度液加在液面上,再将1mL液化混匀的精液小心加在40%的密度梯度液液面上,离心600r/min×20min后弃上清,加入5mL洗涤液吹打混匀后离心200r/min×5min,洗涤步骤再重复一遍后将精子沉淀重悬于0.5mL培养液中。
02.上游法
将液化混匀的1mL精液置于试管底部,轻柔地在液面上方加入1.2mL洗涤液,将试管倾斜45度,置37℃培养箱孵育60min,轻轻将试管恢复直立后,将最上层1mL液体转移到另一支试管,再加入2mL洗涤液吹打混匀,离心200r/min×10min,弃上清后将精子沉淀重悬于0.5mL培养液中。
03.简单洗涤法
将液化混匀的1mL精液加入试管并与1mL洗涤液充分混匀,离心200r/min×10min,小心吸出上清液后将沉淀重悬于1mL培养液再次离心200r/min×10min,弃上清,将精子沉淀重悬于0.5mL培养液中。
相关试剂:精子密度梯度液、精子洗涤液

研究的结果显示,经洗涤后各组精子的活力均有显著提高。而在洗涤后的精子浓度方面,简单洗涤法显著高于其余两类方法,另在活力(PR)和活率(PR+NP)方面,密度梯度离心法和上游法要高于简单洗涤法,最后在回收率的比较上,密度梯度离心法和简单洗涤法则显著高于上游法。

进一步考虑到纳入的少精症样本,研究者还总结出几点有关精液洗涤法的适用建议:
1. 在处理少精症患者精液时,上游法因其回收率较低,不宜被采用;
2. 当精子浓度<15×106/mL且精子总数小于正常值(39×106个)时,为保证处理后最终前向精子总数>10×106个,不适用较繁复的洗涤方法,宜采用简单洗涤法;
3. 当精子的浓度活力在正常值范围内时,密度梯度离心法和上游法能获得更具活力的精子,进一步考虑到密度梯度离心法具备更高的回收率,所以一般选取密度梯度离心法。
综上所述
选择何种精液洗涤法,需要考量精液的不同情况,另选取质优的相关试剂,也会有助于获得尽可能多的优质精子。

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